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  • Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).

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Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).

HPLC es el tipo de cromatografía por elución más versátil y más utilizado para separar y determinar especies en una variedad de materiales orgánicos, inorgánicos y biológicos.

Separación y cuantificación de alta resolución para diversos analitos en medios polares y no polares.

  • Análisis de impurezas.
  • Análisis de compuestos volátiles y no volátiles.
  • Determinación de moléculas neutras, iónicas o zwitteriónicas.
  • Aislamiento y purificación de compuestos.
  • Separación de compuestos estrechamente relacionados.
  • Separaciones desde ultratrazas hasta preparativas y a escala de procesos.
  • Método no destructivo.
  • Método cualitativo y cuantitativo.

Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).

PRINCIPIO FÍSICO-QUÍMICO

Ver más...

  • Principio Físico-Químico.
  • Los solutos se resuelven por las tasas diferenciales de elución mientras pasan a través de una columna cromatográfica. Su separación está gobernada por su distribución entre las fases móviles y estacionarias.
  • El uso exitoso de la cromatografía líquida (LC) para un problema dado requiere la combinación adecuada de una variedad de condiciones operativas, como el tipo de empaque de la columna y fase móvil, longitud y diámetro de la columna, velocidad de flujo de la fase móvil, temperatura de la columna y tamaño de la muestra.

INSTRUMENTACIÓN

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  • RESERVORIO FASE MÓVIL
  • SUMINISTRO DE SOLVENTE
  • INTRODUCCIÓN DE MUESTRA
  • COLUMNA
  • DETECTOR
  • REGISTRADOR

APLICACIONES

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  • Alimentos: Se emplea para identificar y cuantificar contaminantes en productos agrícolas, medir concentración de aditivos, composición y pureza de alimentos y realizar pruebas de autenticidad.
  • Análisis Ambientales: Se utiliza para la detección y cuantificación de contaminantes en el agua, suelo y aire como pesticidas y compuestos orgánicos y para estudiar la degradación de productos químicos en el medio ambiente.
  • Industria Química: Seguridad de que los productos químicos cumplan con las especificaciones de pureza, monitoreo de reacciones en el desarrollo de nuevos compuestos y la separación de muestras complejas
  • Farmacéutica: Se utiliza para analizar la pureza y la concentración de los principios activos en los medicamentos, identificación y cuantificación de metabolitos y monitoreo de la degradación de medicamentos en diferentes condiciones.
  • Industria Cosmética: Control de calidad de materias primas, productos acabados y procesos de fabricación. Esto garantiza la conformidad con los estándares de calidad y la seguridad del producto.
  • Biotecnología: Se utiliza para separar y cuantificar proteínas y péptidos en muestras biológicas, análisis de purificación de DNA y RNA, análisis metabolómico para el estudio de procesos biológicos.
  • Industria Cosmética: Control de calidad de materias primas, productos acabados y procesos de fabricación. Esto garantiza la conformidad con los estándares de calidad y la seguridad del producto.
  • Análisis Forense: Detección, identificación y cuantificación de drogas en muestras biológicas, detección de medicamentos, presencia de agentes tóxicos y adulteraciones en bebidas.
PRINCIPIO FÍSICO-QUÍMICO

Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC).

PRINCIPIO FÍSICO QUÍMICO

    Los solutos se resuelven por las tasas diferenciales de elución mientras pasan a través de una columna cromatográfica. Su separación está gobernada por su distribución entre las fases móviles y estacionarias.

    El uso exitoso de la cromatografía líquida (LC) para un problema dado requiere la combinación adecuada de una variedad de condiciones operativas, como el tipo de empaque de la columna y fase móvil, longitud y diámetro de la columna, velocidad de flujo de la fase móvil, temperatura de la columna y tamaño de la muestra.

Instrumentación

Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC).

Instrumentación

RESERVORIO FASE MÓVIL

El reservorio de fase móvil puede ser cualquier recipiente limpio e inerte. Por lo general, contiene de 1 a 2 litros de solvente, y debe tener una tapa que permita que pase la línea de entrada del tubo.

Es importante desgasificar los solventes antes de usarlos porque las pequeñas burbujas de gas presentes en la fase móvil pueden acumularse en otros componentes, especialmente en las cabezas de las bombas y el detector, interfiriendo en el análisis.

SUMINISTRO DE SOLVENTE

Garantiza la entrega de un flujo de fase móvil preciso, reproducible, constante y sin pulsaciones. Hay dos clases de bombas de HPLC: bombas de presión constante y bombas de flujo constante, siendo estas últimas las más comunes.

La mayoría de las separaciones se pueden hacer utilizando la elución isocrática, que es el uso de un sistema de un solo solvente que no cambia durante el análisis.

INTRODUCCIÓN DE MUESTRA

Utilizan principalmente un mecanismo de válvula. Cuando la válvula está en la posición de carga, se llena el loop (generalmente de 10 a 50 µL de volumen).

Un exceso de muestra de dos a cinco veces asegura que la muestra anterior haya sido purgada completamente. Al girar la válvula desde la posición de carga hasta la posición de inyección, se conecta el loop de muestra al flujo de fase móvil de alta presión, lo que permite que la muestra se envíe a la columna.

REGISTRADOR

Toma la señal electrónica producida por el detector y la representa como un cromatograma, que puede ser evaluado por el usuario. Los registradores rara vez se utilizan hoy en día porque no son capaces de integrar los datos.

Tanto los integradores como las computadoras pueden integrar los picos en los cromatogramas, y las computadoras tienen la ventaja adicional de que guardan electrónicamente los cromatogramas para su posterior evaluación.

COLUMNA

Es el corazón del instrumento de HPLC porque aquí ocurre la separación. Generalmente está hecha de acero inoxidable de grado 316, que es relativamente inerte a la corrosión química y se empaqueta con la fase estacionaria deseada. Las dimensiones comunes para columnas a escala analítica están en el rango de 10 a 25 cm de largo y de 3 a 9 mm de diámetro interno.

DETECTOR

Registra los solutos a medida que son eluidos de la columna. El detector genera una señal eléctrica que es proporcional al nivel de alguna propiedad de la fase móvil o de los solutos. Algunas características de un buen detector de HPLC son sensibilidad, linealidad, previsibilidad en la respuesta, confiabilidad, no destructividad, facilidad de uso y bajo volumen muerto.

Detectores: Absorbancia, fluorescencia, electroquímica, conductividad, índice de refracción, espectrometría de masas.

APLICACIONES

Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC).

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Alimentos

Alimentos

Se emplea para identificar y cuantificar contaminantes en productos agrícolas, medir concentración de aditivos, composición y pureza de alimentos y realizar pruebas de autenticidad.

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Análisis Ambientales

Análisis Ambientales

Se utiliza para la detección y cuantificación de contaminantes en el agua, suelo y aire como pesticidas y compuestos orgánicos y para estudiar la degradación de productos químicos en el medio ambiente.

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Industria Química

Industria Química

Seguridad de que los productos químicos cumplan con las especificaciones de pureza, monitoreo de reacciones en el desarrollo de nuevos compuestos y la separación de muestras complejas.

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Farmacéutica

Farmacéutica

Se utiliza para analizar la pureza y la concentración de los principios activos en los medicamentos, identificación y cuantificación de metabolitos y monitoreo de la degradación de medicamentos en diferentes condiciones.

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Biotecnología

Biotecnología

Se utiliza para separar y cuantificar proteínas y péptidos en muestras biológicas, análisis de purificación de DNA y RNA, análisis metabolómico para el estudio de procesos biológicos.

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Industria Cosmética

Industria Cosmética

Control de calidad de materias primas, productos acabados y procesos de fabricación. Esto garantiza la conformidad con los estándares de calidad y la seguridad del producto.

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Análisis Forense

Análisis Forense

Detección, identificación y cuantificación de drogas en muestras biológicas, detección de medicamentos, presencia de agentes tóxicos y adulteraciones en bebidas.

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