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Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).
HPLC es el tipo de cromatografía por elución más versátil y más utilizado para separar y determinar especies en una variedad de materiales orgánicos, inorgánicos y biológicos.
Separación y cuantificación de alta resolución para diversos analitos en medios polares y no polares.
Análisis de impurezas.
Análisis de compuestos volátiles y no volátiles.
Determinación de moléculas neutras, iónicas o zwitteriónicas.
Aislamiento y purificación de compuestos.
Separación de compuestos estrechamente relacionados.
Separaciones desde ultratrazas hasta preparativas y a escala de procesos.
Método no destructivo.
Método cualitativo y cuantitativo.
Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).
PRINCIPIO FÍSICO-QUÍMICO
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Principio Físico-Químico.
Los solutos se resuelven por las tasas diferenciales de
elución mientras pasan a través de una columna cromatográfica.
Su separación está gobernada por su distribución entre las
fases móviles y estacionarias.
El uso exitoso de la cromatografía líquida (LC) para un problema
dado requiere la combinación adecuada de una variedad de condiciones
operativas, como el tipo de empaque de la columna y fase móvil,
longitud y diámetro de la columna, velocidad de flujo de la fase
móvil, temperatura de la columna y tamaño de la muestra.
INSTRUMENTACIÓN
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RESERVORIO FASE MÓVIL
SUMINISTRO DE SOLVENTE
INTRODUCCIÓN DE MUESTRA
COLUMNA
DETECTOR
REGISTRADOR
APLICACIONES
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Alimentos: Se emplea para identificar y cuantificar contaminantes en productos agrícolas, medir concentración de aditivos, composición y pureza de alimentos y realizar pruebas de autenticidad.
Análisis Ambientales: Se utiliza para la detección y cuantificación de contaminantes en el agua, suelo y aire como pesticidas y compuestos orgánicos y para estudiar la degradación de productos químicos en el medio ambiente.
Industria Química: Seguridad de que los productos químicos cumplan con las especificaciones de pureza, monitoreo de reacciones en el desarrollo de nuevos compuestos y la separación de muestras complejas
Farmacéutica: Se utiliza para analizar la pureza y la concentración de los principios activos en los medicamentos, identificación y cuantificación de metabolitos y monitoreo de la degradación de medicamentos en diferentes condiciones.
Industria Cosmética: Control de calidad de materias primas, productos acabados y procesos de fabricación. Esto garantiza la conformidad con los estándares de calidad y la seguridad del producto.
Biotecnología: Se utiliza para separar y cuantificar proteínas y péptidos en muestras biológicas, análisis de purificación de DNA y RNA, análisis metabolómico para el estudio de procesos biológicos.
Industria Cosmética: Control de calidad de materias primas, productos acabados y procesos de fabricación. Esto garantiza la conformidad con los estándares de calidad y la seguridad del producto.
Análisis Forense: Detección, identificación y cuantificación de drogas en muestras biológicas, detección de medicamentos, presencia de agentes tóxicos y adulteraciones en bebidas.
PRINCIPIO FÍSICO-QUÍMICO
Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC).
PRINCIPIO FÍSICO QUÍMICO
Los solutos se resuelven por las tasas diferenciales de elución
mientras pasan a través de una columna cromatográfica. Su separación
está gobernada por su distribución entre las fases móviles y estacionarias.
El uso exitoso de la cromatografía líquida (LC) para un problema dado
requiere la combinación adecuada de una variedad de condiciones operativas,
como el tipo de empaque de la columna y fase móvil, longitud y diámetro de
la columna, velocidad de flujo de la fase móvil, temperatura de la columna
y tamaño de la muestra.
Instrumentación
Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC).
Instrumentación
RESERVORIO FASE MÓVIL
El reservorio de fase móvil puede ser cualquier recipiente limpio
e inerte. Por lo general, contiene de 1 a 2 litros de solvente,
y debe tener una tapa que permita que pase la línea de entrada del tubo.
Es importante desgasificar los solventes antes de usarlos
porque las pequeñas burbujas de gas presentes en la fase móvil
pueden acumularse en otros componentes, especialmente en las
cabezas de las bombas y el detector, interfiriendo en el análisis.
SUMINISTRO DE SOLVENTE
Garantiza la entrega de un flujo de fase móvil preciso,
reproducible, constante y sin pulsaciones. Hay dos clases
de bombas de HPLC: bombas de presión constante y bombas de
flujo constante, siendo estas últimas las más comunes.
La mayoría de las separaciones se pueden hacer utilizando
la elución isocrática, que es el uso de un sistema de un
solo solvente que no cambia durante el análisis.
INTRODUCCIÓN DE MUESTRA
Utilizan principalmente un mecanismo de válvula.
Cuando la válvula está en la posición de carga, se llena el loop
(generalmente de 10 a 50 µL de volumen).
Un exceso de muestra de dos a cinco veces asegura que la muestra
anterior haya sido purgada completamente. Al girar la válvula desde
la posición de carga hasta la posición de inyección, se conecta el
loop de muestra al flujo de fase móvil de alta presión, lo que
permite que la muestra se envíe a la columna.
REGISTRADOR
Toma la señal electrónica producida por el detector y
la representa como un cromatograma, que puede ser evaluado
por el usuario. Los registradores rara vez se utilizan hoy en día porque no son
capaces de integrar los datos.
Tanto los integradores como las
computadoras pueden integrar los picos en los cromatogramas, y
las computadoras tienen la ventaja adicional de que guardan
electrónicamente los cromatogramas para su posterior evaluación.
COLUMNA
Es el corazón del instrumento de HPLC porque aquí ocurre
la separación. Generalmente está hecha de acero inoxidable de grado 316,
que es relativamente inerte a la corrosión química y se
empaqueta con la fase estacionaria deseada. Las dimensiones comunes
para columnas a escala analítica están en el rango de 10 a 25 cm de
largo y de 3 a 9 mm de diámetro interno.
DETECTOR
Registra los solutos a medida que son eluidos de la columna.
El detector genera una señal eléctrica que es proporcional al nivel
de alguna propiedad de la fase móvil o de los solutos.
Algunas características de un buen detector de HPLC son sensibilidad,
linealidad, previsibilidad en la respuesta, confiabilidad,
no destructividad, facilidad de uso y bajo volumen muerto.
Detectores: Absorbancia, fluorescencia, electroquímica,
conductividad, índice de refracción, espectrometría de masas.
APLICACIONES
Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC).
Alimentos
Alimentos
Se emplea para identificar y cuantificar contaminantes
en productos agrícolas, medir concentración de aditivos,
composición y pureza de alimentos y realizar pruebas de
autenticidad.
Análisis Ambientales
Análisis Ambientales
Se utiliza para la detección y cuantificación de contaminantes
en el agua, suelo y aire como pesticidas y compuestos orgánicos
y para estudiar la degradación de productos químicos en el medio
ambiente.
Industria Química
Industria Química
Seguridad de que los productos químicos cumplan con las
especificaciones de pureza, monitoreo de reacciones en el
desarrollo de nuevos compuestos y la separación de muestras
complejas.
Farmacéutica
Farmacéutica
Se utiliza para analizar la pureza y la concentración
de los principios activos en los medicamentos,
identificación y cuantificación de metabolitos y
monitoreo de la degradación de medicamentos en
diferentes condiciones.
Biotecnología
Biotecnología
Se utiliza para separar y cuantificar proteínas y
péptidos en muestras biológicas, análisis de purificación
de DNA y RNA, análisis metabolómico para el estudio de
procesos biológicos.
Industria Cosmética
Industria Cosmética
Control de calidad de materias primas, productos
acabados y procesos de fabricación. Esto garantiza
la conformidad con los estándares de calidad y la
seguridad del producto.
Análisis Forense
Análisis Forense
Detección, identificación y cuantificación de drogas
en muestras biológicas, detección de medicamentos,
presencia de agentes tóxicos y adulteraciones en bebidas.
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