Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).
HPLC es el tipo de cromatografía por elución más versátil y más utilizado para separar y determinar especies en una variedad de materiales orgánicos, inorgánicos y biológicos.
Separación y cuantificación de alta resolución para diversos analitos en medios polares y no polares.
- Análisis de impurezas.
- Análisis de compuestos volátiles y no volátiles.
- Determinación de moléculas neutras, iónicas o zwitteriónicas.
- Aislamiento y purificación de compuestos.
- Separación de compuestos estrechamente relacionados.
- Separaciones desde ultratrazas hasta preparativas y a escala de procesos.
- Método no destructivo.
- Método cualitativo y cuantitativo.
Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC).
PRINCIPIO FÍSICO-UÍMICO
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- Principio Físico-uímico.
- Los solutos se resuelven por las tasas diferenciales de elución mientras pasan a través de una columna cromatográfica. Su separación está gobernada por su distribución entre las fases móviles y estacionarias.
- El uso exitoso de la cromatografía líquida (LC) para un problema dado requiere la combinación adecuada de una variedad de condiciones operativas, como el tipo de empaque de la columna y fase móvil, longitud y diámetro de la columna, velocidad de flujo de la fase móvil, temperatura de la columna y tamaño de la muestra.
INSTRUMENTACIÓN
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- RESERVORIO FASE MÓVIL
- SUMINISTRO DE SOLVENTE
- INTRODUCCIÓN DE MUESTRA
- COLUMNA
- DETECTOR
- REGISTRADOR
APLICACIONES
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- Alimentos: Se emplea para identificar y cuantificar contaminantes en productos agrícolas, medir concentración de aditivos, composición y pureza de alimentos y realizar pruebas de autenticidad.
- Análisis Ambientales: Se utiliza para la detección y cuantificación de contaminantes en el agua, suelo y aire como pesticidas y compuestos orgánicos y para estudiar la degradación de productos químicos en el medio ambiente.
- Industria uímica: Seguridad de que los productos químicos cumplan con las especificaciones de pureza, monitoreo de reacciones en el desarrollo de nuevos compuestos y la separación de muestras complejas
- Farmacéutica: Se utiliza para analizar la pureza y la concentración de los principios activos en los medicamentos, identificación y cuantificación de metabolitos y monitoreo de la degradación de medicamentos en diferentes condiciones.
- Industria Cosmética: Control de calidad de materias primas, productos acabados y procesos de fabricación. Esto garantiza la conformidad con los estándares de calidad y la seguridad del producto.
- Biotecnología: Se utiliza para separar y cuantificar proteínas y péptidos en muestras biológicas, análisis de purificación de DNA y RNA, análisis metabolómico para el estudio de procesos biológicos.
- Industria Cosmética: Control de calidad de materias primas, productos acabados y procesos de fabricación. Esto garantiza la conformidad con los estándares de calidad y la seguridad del producto.
- Análisis Forense: Detección, identificación y cuantificación de drogas en muestras biológicas, detección de medicamentos, presencia de agentes tóxicos y adulteraciones en bebidas.
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Preguntas Frecuentes
- ¿Qué es la HPLC y cuándo se utiliza?
- La HPLC (High-Performance Liquid Chromatography) separa, identifica y cuantifica componentes de una mezcla al hacerlos pasar a alta presión por una columna cromatográfica. Es la técnica de elección en farmacéutica, alimentos, cosméticos, ambiental y análisis clínico para compuestos no volátiles.
- ¿Cuál es la diferencia entre HPLC y UHPLC?
- La UHPLC (Ultra-High Performance LC) opera a presiones superiores a 600 bar con columnas de partículas sub-2 µm, logrando mayor resolución, velocidad de análisis y menor consumo de solvente. Permite analizar muestras en minutos en lugar de decenas de minutos con HPLC convencional.
- ¿Qué detectores se usan en HPLC?
- Los más comunes son: UV/Vis de longitud de onda variable (VWD) o de arreglo de diodos (DAD), fluorescencia (FLD) para alta sensibilidad, índice de refracción (RI) para azúcares y polímeros, y el más potente: el detector de espectrometría de masas (LC-MS/MS).
- ¿Cómo se valida un método HPLC?
- Según ICH Q2(R1) se evalúan: especificidad, linealidad, rango, exactitud (recuperación %), precisión (repetibilidad e intermedia), límite de detección (LOD), límite de cuantificación (LOQ) y robustez. La documentación debe respaldar el uso regulatorio del método.
- ¿Qué mantenimiento preventivo requiere un sistema HPLC?
- Cambio periódico de pistones y sellos de la bomba, sustitución de filtros en línea, limpieza del compartimento de columna, verificación de la lámpara del detector UV y purga del sistema con solvente adecuado. Inolab ofrece contratos de mantenimiento preventivo con técnicos certificados.